Validación de un método cualitativo de "screening" de muestras para el análisis microbiológico de cosméticos empleando citometría de flujo con detección fluorimétrica

Abstract

El objetivo general de esta Tesis Doctoral ha sido la validación analítica de un método cualitativo rápido de cribado o de screening de muestras, para llevar a cabo el control de calidad microbiológica de muestras cosméticas empleando citometría de flujo con detección por fluorescencia. Los principales resultados obtenidos en esta Tesis Doctoral pivotan alrededor de tres conjuntos de estudios realizados, todo ello, para garantizar el uso previsto que consiste en el cumplimiento de las especificaciones cosméticas y en la obtención de resultados de igual o mejor calidad en un tiempo menor que el establecido por el método tradicional. En primer lugar, se ha llevado a cabo la neutralización del conservante cosmético como paso clave en el análisis de los productos cosméticos estudiándose la inoculación individual no sólo de cada cepa no permitida por la especificación cosmética (P. aeruginosa, S. aureus, E. coli y C. albicans) sino también de aquellas especificadas en la Farmacopea Europea (Bacillus subtilis y Aspergillus brasiliensis). En este tipo de estudios, se han encontrado unas condiciones óptimas de neutralización química y por dilución de los conservantes para todos los productos cosméticos estudiados correspondientes a 1:100 (p/p) durante un tiempo de actuación de 30 min. En segundo lugar, la evaluación de los parámetros de calidad (falsos positivos, falsos negativos, fiabilidad, no fiabilidad, sensibilidad y especificidad) llevada a cabo tanto en los estudios de los blancos como en los estudios de inoculación individual de las muestras de geles para todas las cepas prohibidas, ha permitido demostrar no sólo la pertinencia y viabilidad del criterio instrumental de clasificación de muestras cosméticas sino inclusive la simplificación del mismo. Asimismo, se ha demostrado que la capacidad de detección del método permite asegurar ausencia de patógenos prohibidos en todos los casos examinados excepto para la levadura C. albicans. Por último, se ha demostrado que el método propuesto es válido para el análisis de todos los productos cosméticos acabados debido a que cumple con especificaciones (excepto para C. albicans) generando resultados de igual o superior calidad analítica a los obtenidos por el método tradicional (determinación de microorganismos viables pero no cultivables) y en un tiempo de análisis menor (disminución del 60 %), permitiendo por ello el aseguramiento de la calidad microbiológica de todos los productos cosméticos comerciales. Por todo ello, y con la sola excepción de la detección de C. albicans, se puede concluir que se ha llevado a cabo con éxito la validación analítica de un método cualitativo rápido de cribado de muestras, mediante citometría de flujo con detección por fluorescencia para llevar a cabo el control de calidad microbiológica de los productos cosméticos comercializados por Antonio Puig S.A.