RT info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
T1 Identificación de biomarcadores mediante técnicas de proteómica cuantitativa para el diagnóstico y pronóstico de cáncer de células renales
A1 Diez Nicolás, Víctor
K1 Ciencias Médicas. Oncología
K1 Cirugía Urológica
K1 Medicina
K1 Medicine
AB INTRODUCCIÓN: en la actualidad no existe ningún marcador molecular con utilidad clínica en el carcinoma de células renales (CCR). La identificación de biomarcadores tiene utilidad directa tanto en el diagnóstico y pronóstico como en la respuesta al tratamiento. Los resultados obtenidos en los trabajos previos son dispares, y las propuestas de marcadores moleculares no se han llegado a validar. La proteómica permite el estudio a gran escala de la estructura y función de las proteínas, y sus cambios bajo la influencia de perturbaciones biológicas. Ofrece, como ventaja con respecto a los estudios genéticos, información sobre la expresión concreta de los genes, así como de los posibles cambios postraduccionales. La mayor parte de los estudios de marcadores en tejido utilizan, como referencia frente al CCR, tejido sano del mismo órgano (en adelante “NT”). No obstante, no se ha analizado, hasta la fecha, si ese tejido se puede considerar verdaderamente sano. HIPÓTESIS: las técnicas de proteómica cuantitativa pueden permitir el análisis de muestras de CCR y de tejido “NT”, identificando concentraciones diferenciadas de proteínas en diferentes tipos de muestras, así como aportando información de las rutas metabólicas alteradas. La comparación del tejido “NT” con otro tejido sano, mediante estas técnicas, permitiría conocer posibles cambios proteómicos presentes en ese tejido debido a modificaciones en el microambiente peritumoral. OBJETIVOS: describir el proteoma de dos tejidos de referencia diferentes, el tejido “NT” y tejido de riñón de donación de órganos (en adelante “Control”), así como analizar sus diferencias metabólicas y proteicas. Describir el proteoma del CCR tipo células claras (CCRcc) y compararlo con los tejidos de referencia y con otro tipo de CCR, el cromófobo (CCRcr). Proponer una firma de proteínas como posibles biomarcadores del diagnóstico del CCR.  MATERIALES Y MÉTODOS: se realizó un estudio cuasiexperimental de comparación y obtención de datos transversal. Se incluyeron muestras tisulares en cuatro grupos diferentes: muestras de CCRcc (de 12 pacientes), muestras “NT” (de 12 pacientes), muestras de CCRcr (de 4 pacientes) y muestras “Control” (de 17 pacientes). Mediante técnica iTRAQ (isobaric tags for realitive and absolute quantification), se analizaron los cuatro grupos, identificando diferencias en las concentraciones de proteínas de forma relativa. Se consideraron significativas las diferencias con un ratio superior a 2. Posteriormente se realizó un análisis bioinformático de la función y metabolismo en el que esas proteínas estaban implicadas. RESULTADOS: se identificaron 3900 proteínas en el estudio. En la comparación entre “NT” y “Control” se evidenció que ambos tejidos presentan grandes similitudes. Sólo 23 proteínas presentaron diferencias significativas entre ambas muestras. Se comprobó que “NT” está sometido a cambios inflamatorios y de respuesta de fase aguda muy llamativos. Destacan la elevación de proteínas de la cascada de reacción de fase aguda, como haptoglobina, apolipoproteínas, proteínas del complemento y fibrinógeno. La comparación de CCRcc frente a los dos tejidos de referencia mostró grandes diferencias. Destacaron los cambios en la producción de energía celular, en la matriz extracelular y en el metabolismo lipídico. En cuanto al primero, se apreció que en CCRcc la respiración celular se realiza fundamentalmente por la vía de la glicólisis en detrimento del ciclo de Krebs (mitocondrial), como expresión de la activación de HIF1α, destacando la elevación de enolasa. En cuanto a la remodelación de la matriz extracelular, se apreció una activación de la transición epitelio-mesenquimal, destacando la elevación de metaloproteasa 9, fibronectina, periostina y trombospondinas 1 y 2. En cuanto a los cambios en el metabolismo lipídico, se apreció una disminución generalizada del mismo en el tejido CCRcc. Las proteínas más destacables de este grupo fueron la elevación de FABP7 y perilipina, y la disminución de FABP1. La comparación entre CCRcc y CCRcr mostró que en CCRcr no está tan suprimida la respiración mitocondrial. Destacó la elevación de NNMT en CCRcc. CONCLUSIONES: este estudio es el que más proteínas ha identificado en un análisis sobre CCR. Las rutas de actividad inflamatoria y respuesta de fase aguda están más activadas en “NT” que en “Control”. El tejido CCRcc presenta una elevación de la vía de la glicólisis en detrimento del ciclo de Krebs. Así mismo, desarrolla modificaciones de la matriz extracelular en relación con la invasión y diseminación tumoral, y una disminución global del metabolismo lipídico. Las proteínas que más potencial tienen como posibles biomarcadores diagnósticos de CCR son la elevación de enolasa 2, galectina, metaloproteasa 9, periostina, fibronectina, trombospondinas 1 y 2, FAPB7, perilipina 2, NNMT y haptoglobina, así como la disminución de FABP1.
YR 2020
FD 2020
LK http://hdl.handle.net/10017/50556
UL http://hdl.handle.net/10017/50556
LA spa
DS MINDS@UW
RD 02-may-2024