RT info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
T1 Estrategias celulares y moleculares en el cribado de nuevos agentes anti-Leishmania
A1 Moreno Mateos, David
K1 Leishmaniosis-Tratamiento
K1 Biología molecular
K1 Ciencias de la salud
K1 Medicina
K1 Medicine
K1 Ciencia
K1 Citología
K1 Cytology
K1 Farmacología
K1 Pharmacology
K1 Microbiología y parasitología
K1 Microbiology and parasitology
AB El tratamiento de las enfermedades parasitarias producidas por los tripanosomátidos requiere el desarrollo de nuevos agentes que conlleven más selectividad y un mejor perfil farmacológico que los actualmente existentes. Afrontamos este desafío utilizando dos estrategias distintas. En primer lugar, dado que algunos nuevos fármacos se descubren por simple azar, mediante la evaluación de amplias librerías químicas, decidimos implementar un cribado de alto rendimiento que nos permitiría determinar su citotoxicidad en promastigotes y amastigotes de Leishmania, así como en dos líneas humanas (Jurkat y THP-1). Empleando este método de cribado, evaluamos más de 160 compuestos. El resultado en el tratamiento de células THP-1 infectadas con amastigotes fue de siete hits, cuatro de ellos comparables o incluso con mejor actividad que edelfosina, fármaco leishmanicida estándar. Así, estos derivados representan nuevas cabezas de serie para realizar estudios con más profundidad dirigidos a establecer su mecanismo de acción. Por otra parte, perseguimos una innovadora aproximación en el tratamiento de la leishmaniasis, consistente en la inhibición de la dimerización de la enzima tripanotión reductasa (TryR), una flavoenzima homodimérica esencial y única para los parásitos kinetoplastos, como son Trypanosoma, responsable de la enfermedad de Chagas y la enfermedad del sueño, así como Leishmania, responsable de las leishmaniasis cutánea y visceral. Se piensa que la TryR es la enzima central en el metabolismo redox de estos protozoos dado que es la única que acopla la transferencia de equivalentes de reducción de la pareja NADP+/NADPH a las especies con tioles. Mediante estudios computacionales basados en estructura, encontramos los puntos calientes o hot-spots presentes en la superficie de dimerización y responsables, presumiblemente, de la mayor parte de la afinidad intermolecular.  Utilizando técnicas de biología molecular, bioquímica y de estudio de la oligomerización, encontramos que el glutámico 436 (E436), uno de los tres candidatos iniciales identificado como un hot-spot putativo, es un residuo clave en la dimerización de la TryR. Basándonos en estos hallazgos, diseñamos un péptido que inhibe tanto la dimerización como la actividad de la TryR. Además, demostramos que este péptido presenta una actividad leishmanicida en macrófagos humanos infectados con amastigotes. Por último, presentamos algunos resultados que sugieren la existencia de un sensor biológico en la TryR de los tripanosomátidos, que les permitiría detectar un ataque oxidante y reaccionar frente al mismo. En resumen, en el presente trabajo se muestran dos distintas aproximaciones dirigidas a cubrir la necesidad de desarrollar nuevos fármacos eficientes y seguros para el tratamiento de la leishmaniasis.
YR 2010
FD 2010
LK http://hdl.handle.net/10017/9141
UL http://hdl.handle.net/10017/9141
LA spa
DS MINDS@UW
RD 25-abr-2024