RT info:eu-repo/semantics/article
T1 Puesta a punto de ensayos de cuantificación de dimerización y actividad de la superóxido dismutasa de hierro A de "Leishmania infantum"
A1 García Soriano, Juan Carlos
A1 Lucio Ortega, Héctor Elessar de
A1 Jiménez Ruiz, Antonio
K1 Leishmania infantum
K1 Superóxido dismutasa
K1 Actividad
K1 Dimerización
K1 Citocromo c
K1 ELISA
K1 Biología
K1 Biology
K1 Farmacia
K1 Pharmacy
AB Los parásitos del género Leishmania son los agentes causales de la leishmaniasis. Estos parásitos tienen la capacidad de sobrevivir dentro de las vacuolas fagocíticas de los macrófagos a pesar de las condiciones de pH y estrés oxidativo allí generadas. Esta resistencia se debe a diversos mecanismos biológicos que comprenden enzimas de detoxificación de las especies reactivas de oxígeno, entre otras. Estas enzimas son potenciales dianas terapéuticas para el tratamiento de la leishmaniasis. Una de estas enzimas es la superóxido dismutasa que cataliza la dismutación del anión superóxido, una especie reactiva de oxígeno con capacidad de originar otras especies reactivas más tóxicas. Leishmania cuenta con 4 superóxido dismutasas de hierro. La superóxido dismutasa de hierro A (Fe-SODA) se localiza en la mitocondria, lugar de producción endógena de superóxido. Se ha visto que la Fe-SODA se sobrexpresa en las formas parasitarias que infectan los macrófagos y que protege de la muerte celular inducida por el tratamiento con miltefosina. En este trabajo se ha clonado, expresado y purificado la Fe-SODA de Leishmania infantum con dos “etiquetas” (tags) moleculares distintas que permiten generar una versión heterodimérica para la puesta a punto de dos ensayos que permitan evaluar la eficacia de compuestos dirigidos contra la enzima. Uno de los ensayos que se ha optimizado en este trabajo ha sido un ensayo de cuantificación de la dimerización basado en la técnica ELISA usando anticuerpos contra las dos etiquetas del heterodímero, uno para pegar a la placa y el otro para evaluar el porcentaje de enzima dimérica. El segundo ensayo está dirigido a medir la actividad catalítica de la enzima. El ensayo de actividad se basa en la producción de superóxido por el sistema xantina/xantina oxidasa y en la competencia por el superóxido entre la Fe-SODA y el citocromo c, una proteína que cambia de color al reducirse por el superóxido
PB InnovARTE, Grupo Docente. Universidad de Alcalá
SN 1886-8746
YR 2016
FD 2016
LK http://hdl.handle.net/10017/50656
UL http://hdl.handle.net/10017/50656
LA spa
DS MINDS@UW
RD 16-abr-2024