Desarrollo de sistemas de detección de Leishmania basados en aptámeros

Abstract

Antecedentes: La leishmaniasis es una enfermedad causada por un parásito del género Leishmania que afecta a millones de personas en todo el mundo. Los actuales sistemas diagnósticos de la leishmaniasis presentan importantes limitaciones, por lo que existe una gran demanda para desarrollar nuevos sistemas económicos, rápidos y que no requieran personal especializado. Los aptámeros son ácidos nucleicos de cadena sencilla capaces de interaccionar de forma específica y con alta afinidad con una molécula diana y se utilizan actualmente con fines de detección, diagnósticos y terapéuticos. Métodos: Partiendo de una población de aptámeros de ssDNA obtenida previamente contra la proteína histona H3 de Leishmania infantum (LiH3), identificamos dos aptámeros individuales, AptLiH3#4 y AptLiH3#10. A continuación, realizamos ensayos ELONA, western blot y slot blot para establecer la especificidad y afinidad de los aptámeros por la histona LiH3. También, realizamos ensayos ELONA utilizando péptidos correspondientes a secuencias superpuestas de LiH3 para mapear la interacción aptámero:LiH3. Además, desarrollamos diferentes sistemas de detección basados en ELONA utilizando los aptámeros como moléculas de reconocimiento y detección para determinar cuál es el que muestra una mayor sensibilidad. Resultados: Ambos aptámeros tienen alta afinidad y especificidad por LiH3 endógena en lisados de promastigotes. De los diferentes sistemas ensayados, hemos confirmado que el ELONA acoplado a PCR a tiempo real (ELONA-qPCR) es el más sensible, alcanzándose un límite de detección de 600 parásitos. Conclusiones: Los aptámeros identificados podrían ser utilizados como moléculas de bioreconocimiento de la histona LiH3, pero es necesario optimizar el sistema de detección para su uso en el diagnóstico de la leishmaniasis.