%0 Journal Article 
%A Hernández Sánchez, Inmaculada
%T Regeneración clonal de alcornoques adultos ("Quercus suber" L.) mediante embriogénesis somática
%D 2007
%U http://hdl.handle.net/10017/4608
%X El alcornoque (Quercus suber L.) es una de las especies arbóreas mediterráneas más importantes, que se extiende por el litoral mediterráneo occidental. España posee la mayor superficie de alcornocal después de Portugal, encontrándose las mayores extensiones en Andalucía, Extremadura y Cataluña. El corcho es el principal producto de esta especie y su uso más importante radica en la producción de tapones para la industria del vino. El alcornoque, además de valor económico, posee un gran valor social y ecológico en España, formando parte de las dehesas, sistemas silvopastorales de gran importancia para el desarrollo rural de las zonas donde se encuentra. El alcornoque está considerado como una especie recalcitrante tanto en sistemas de conservación de sus semillas como en su capacidad morfogénica. Actualmente está seriamente amenazado debido a diversas causas, por lo que es necesario desarrollar técnicas de propagación vegetativa eficaces que permitan la conservación de los recursos genéticos y la mejora de la especie. La embriogénesis somática está ampliamente considerada como la mejor modalidad de regeneración basada en técnicas de cultivo de tejidos vegetales, que se utiliza en biotecnología forestal. Este trabajo se centra en el estudio de determinados aspectos de la embriogénesis somática utilizada como vía para la regeneración clonal de alcornoques adultos. La memoria de tesis se ha dividido en varios capítulos, que se corresponden con las sucesivas fases del proceso: inducción de la embriogénesis somática, multiplicación mediante embriogénesis secundaria que da lugar a un proceso recurrente, y conversión de los embriones en planta, estudiándose el comportamiento en campo de las plantas regeneradas. Además se ha evaluado la aplicación de marcadores de ADN tipo AFLP para la determinación de la uniformidad genética de los parentales. La inducción de la embriogénesis somática se realizó en hojas en expansión, obtenidas a partir de brotes epicórmicos de ramas tomadas de alcornoques adultos. El protocolo utilizado se basó en la aplicación de los reguladores de crecimiento ácido 1-naftalenacético (ANA) y 6-bencilaminopurina (BAP), en una primera fase a concentraciones altas, en una segunda fase a concentración reducida, y en una tercera fase en medio sin reguladores. Los primeros embriones somáticos aparentemente aparecen directamente sobre el tejido, formando enseguida proliferaciones embriogénicas por embriogénesis secundaria, sin pérdida de esta capacidad proliferativa con el tiempo, siendo su potencial multiplicativo muy alto. Los cultivos embriogénicos se fraccionaron y transfirieron mensualmente a medio de cultivo fresco. A continuación se procedió a la conversión de los embriones somáticos, lo que supuso la maduración y la germinación adecuadas de los mismos, y la transferencia a condiciones ex vitro de las plantas somáticas para su aclimatación. Se ha comprobado que la presencia conjunta de ANA y BAP, su concentración y el tiempo de exposición determinan la respuesta embriogénica, siendo las más efectivas 50 ?M de ANA y 10 ?M de BAP aplicadas durante 30 días en la primera fase. Además se sugiere la existencia de una ventana en el desarrollo de la hoja más sensible a la inducción, pues las hojas mayores de 15 mm perdieron la capacidad embriogénica, equivalente a lo establecido para la inducción de embriogénesis somática en embrión cigótico de alcornoque. Se ha determinado que tanto el genotipo como el momento de recolección y su interacción, influyen en la respuesta embriogénica. Se ha constatado que existe control genético sobre la inducción de embriogénesis: la heredabilidad en sentido estricto de la capacidad de las hojas para dar embriogénesis somática, h2i =0,41, indica cierto grado de control genético aditivo sobre este carácter. Sin embargo no se han observado diferencias entre procedencias geográficas en relacion a esta capacidad, siendo más importantes las capacidades individuales. Se ha verificado que es posible la conservación en frío de los cultivos embriogénicos durante cuatro meses, lo que permite reducir los gastos de mantenimiento asociados a las transferencias frecuentes. El genotipo también influyó en la capacidad proliferativa de los cultivos y en la conversión de los embriones somáticos. La germinación de los embriones somáticos no se vió afectada por la madurez de los embriones en términos de tamaño y peso fresco, pero sí la supervivencia de las plantas generadas a partir de éstos. Se ha establecido una parcela de ensayo con plantas somáticas procedentes de alcornoques sobresalientes y de sus progenies de medio-hermanos, que permite estudiar su comportamiento y su comparación con plantas cigóticas. La supervivencia y los crecimientos iniciales de las plantas de origen cigótico fueron superiores a las de origen somático, lo que estaría relacionado con las mayores reservas del embrión cigótico. Las plantas somáticas de origen adulto crecieron más que las de origen juvenil e igualaron pronto a las de origen cigótico, mostrando el valor genético de los árboles sobresalientes transferido a su progenie vegetativa. Con este trabajo se confirma la validez del proceso embriogénico para la propagación vegetativa de alcornoques adultos, habíéndose obtenido plantas de todos los árboles selectos en los que se ha acometido su clonación, incluido un alcornoque singular de la isla de Menorca en riesgo de extinción, como ejemplo de conservación de recursos genéticos. Los marcadores AFLP muestran una gran sensibilidad para revelar diferencias, pero algunas de ellas cabe achacarlas a inconsistencias de la técnica. Estas inconsistencias, que llegaron al 3,8% de polimorfismo, estuvieron relacionadas con el genotipo. Cuando se analizaron hojas tomadas de diferentes posiciones dentro de siete árboles, todos estuvieron por debajo de este nivel o igualados al mismo, excepto uno que alcanzó el 7,1% de polimorfismo. Ello hace necesario determinar el posible nivel de variación preexistente en el material a clonar, antes de acometer ensayos de detección precoz de variación somaclonal.
%K Alcornoques - Embriogénesis somática
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%~ Biblioteca Universidad de Alcala